· SpCas9 识别 NGG PAM；评分 = 100 − |GC−55|×2 − polyT(≥4)罚分 − N 碱基罚分。poly-T 会提前终止 U6 转录。· 本工具为初步设计，建议结合 CHOPCHOP/Benchling/CRISPOR 评估 off-target 与切割效率（如 Doench 2016 模型）。