评分标准：Tm 接近 60°C、GC 接近 50%、3' 端 GC 夹、无连续 ≥4 同碱基、无自二聚体/引物对 3' 互补。建议合成前用 Primer-BLAST 验证特异性。
· 反向引物序列即为合成序列（已做反向互补）。· Tm 采用 Wallace（≤13nt）与 GC 法（>13nt）估算，正式实验建议用最近邻法（如 Primer3、OligoAnalyzer）复核。