① 核酸浓度换算（OD260）

浓度 (ng/µL) = A260 × 稀释倍数 × 系数。1 A260 ≈ 50 µg/mL dsDNA。寡核苷酸建议按实际 MW/ε 计算。

② 双链 DNA 质量 ↔ 摩尔换算

ng = 0.66 × pmol × bp；pmol = ng ÷ (0.66 × bp)。例：1 pmol 1 kb dsDNA = 660 ng。

③ 连接反应摩尔比（插入:载体）

所需插入片段 (ng) = 载体 (ng) × (插入 bp ÷ 载体 bp) × 摩尔比。常规连接用 3:1，平末端可用 5:1–10:1。

④ 溶液稀释 C₁V₁ = C₂V₂

V₁ = C₂ × V₂ ÷ C₁，补溶剂至 V₂。提示：引物工作液常用 10 µM，储存液 100 µM。